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免疫酶標固相載體方法
更新時間:2011-06-27 點擊量:1519

免疫酶技術ELISA法是一項先進的免疫化學測定技術,自20世紀60年中期問世70年代初發(fā)展以來,引起了許多學者有關技術人員的重視。這是因為免疫酶技術有其*的優(yōu)點.

免疫酶標固相載體方法,根據(jù)固相載體的不同,一般分為三類,即酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)和*抗原底物珠(Defined Antigen Substrate Spheres,簡稱DASS)體系測定。后來又發(fā)展出纖維素薄膜作為載體的ELISA檢測法,俗稱Dot-ELISA.。ELISA和Dot-ELISA的差別主要是所用載體不同,由于纖維素薄膜比聚苯乙烯具有更多的優(yōu)點,因此目前Dot-ELISA的使用越來越廣泛。

一,固相載體

任何適用于放射免疫測定的固相載體(也稱為固體相),均可用于免疫酶標固相載體的方法中。

免疫酶技術中使用的固相載體一般分為兩類,一類是具有疏松結構的小球狀物質,另一類是塑料平板或管。

小球狀物載體

在免疫酶技術中,使用zui早的疏松的小球狀物載體是微晶纖維素(Micro-crystalline Cellulose),后來逐漸使用瓊脂糖珠(Sepharose 4B),形成*抗原底物珠(Defined Antigen Substrate Spheres,簡稱DASS)體系。瓊脂糖珠經(jīng)活化后,抗體或抗原蛋白質是通過共價鍵與小珠結合的,結合方式如下:

通過CNBr共價偶合的抗原或抗體形成的結合物是穩(wěn)定的,但是在一系列處理過程中,操作復雜,標記酶容易失活,影響實驗結果的因素較多,加之在測定過程中,分離和清洗懸浮小珠要經(jīng)多次離心,步驟繁瑣,因此實際應用較少。

另外,有人曾將聚丙烯酰胺凝膠(Biogel P-300)和一定孔徑的玻璃珠(Controlled Poreglass)作為固相載體。

也有人用乙酰氯甲酸鹽(Ethylchloroformate)和戊二醛作為聚合劑,使免疫反應物相互交聯(lián)而成為固態(tài)。

Kamefusa等發(fā)現(xiàn),硅碎片(Silicon Pieces)作為載體,物理吸附穩(wěn)定,制作簡易且價格低廉。

大多數(shù)小球狀物載體很難適合于免疫酶技術的大規(guī)模檢測。

 

滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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